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                    PikoGreen dsDNA定量試劑盒 使用說(shuō)明書

                    發(fā)布時(shí)間:2017/11/14      點(diǎn)擊次數(shù):1262

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                    PikoGreen dsDNA定量試劑盒(Broad Range)

                    產(chǎn)品名稱

                    貨號(hào)

                    規(guī)格

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                    價(jià)格(元)

                    PikoGreen dsDNA定量試劑盒(Broad Range)

                    D1101L1125

                    200 assay

                    4℃

                    650

                     

                    產(chǎn)品描述

                    PikoGreen是一種極為靈敏的雙鏈DNA熒光染料,于雙鏈DNA的定量。測(cè)定DNA濃度在cDNA文庫(kù)構(gòu)建、DNA亞克隆、PCR產(chǎn)物估測(cè)等領(lǐng)域中非常重要,另外疫苗等生物制品中殘留微量DNA的檢測(cè)因關(guān)系人身健康,顯得尤為重要。

                    相比傳統(tǒng)的方法,Pikogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下優(yōu)勢(shì):①靈敏:數(shù)量級(jí)較UV吸光讀數(shù)更敏感,可節(jié)省樣品;②特異性強(qiáng):只結(jié)合dsDNA,特異性強(qiáng),不受樣品常規(guī)污染影響。傳統(tǒng)紫外吸光法容易受樣品中存在的單鏈DNA,蛋白,RNA等影響;③耐受性好:耐受較高濃度的鹽、尿素、乙醇、CHCl?、去垢劑、蛋白或瓊脂糖,可以直接定量PCR擴(kuò)增產(chǎn)物而無(wú)需從反應(yīng)混合物中純化DNA。④線性范圍寬:PikoGreen dsDNA染料測(cè)定DNA濃度,在100pg/ml-100ng/ml范圍內(nèi)呈良好線性;熒光計(jì)兼容。⑤容易使用:在樣品中加入染料,等待5-6分鐘染色,然后讀數(shù)即可,且適用于96和384孔板;與大多數(shù)基于熒光的酶標(biāo)儀和可適用于各種DNA樣品分析,PCR的分析、芯片樣品、DNA損傷分析、酶活性分析、基因組DNA定量以及復(fù)雜混合物中dsDNA的檢測(cè)和病毒DNA定量等多種領(lǐng)域。

                    PikoGreen僅與DNA雙鏈結(jié)合后才發(fā)出熒光,且所產(chǎn)生的熒光與DNA濃度呈正比,在存在ssDNA、RNA和單體核苷酸的條件下,可以選擇性地檢測(cè)低至25pg/ml的dsDNA。該分析在四個(gè)數(shù)量級(jí)范圍內(nèi)呈線性,且?guī)缀鯚o(wú)序列依賴性,可以地測(cè)量多個(gè)來(lái)源的DNA,包括基因組DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。該方法因其穩(wěn)定性、靈敏性,已經(jīng)錄入《中國(guó)藥典》。

                    PikoGreen dsDNA定量試劑盒(Broad Range)(兼容Qubit 3.0)是李記生物研發(fā)的dsDNA定量試劑盒,具有線性dsDNA特異性好、線性范圍寬、操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)。

                    產(chǎn)品組分

                    PikoGreen dsDNA 定量試劑盒組份(1000 assay)

                                  A:1×定量緩沖液      250 mL

                                  B:100×反應(yīng)液         5 mL

                                  C:100×反應(yīng)增強(qiáng)液   5 mL

                                  D:dsDNA 標(biāo)準(zhǔn)品    9 x 0.5 mL(0 , 2, 6.25, 12.5 , 25, 50 , 100, 150 and 200 ng/uL)

                    技術(shù)資料

                    1. Ex(nm):350

                    2. Em(nm):460

                    運(yùn)輸與保存方法

                    冰袋運(yùn)輸。收到貨后-4℃避光干燥保存。如果較長(zhǎng)時(shí)間不用,建議把TE緩沖液及dsDNA標(biāo)準(zhǔn)品放置于-20℃保存。

                    使用方法:(以96孔板為例)

                    1.使用前,將產(chǎn)品從儲(chǔ)存條件下取出恢復(fù)至室溫。PikoGreen提供的是DMSO溶液,在4℃存放時(shí)成固體,可37℃水浴溶解。每個(gè)組分應(yīng)充分震蕩或渦旋混勻、離心,以免造成不必要的試劑損耗。

                    2.配制PikoGreen工作液,分別吸取20ml組分A, 200uL組分B, 200uL組分C配制成20ml 1 x Piko Green工作液。新配工作液應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)使用,工作液重新存放使用時(shí)須重懸,以免染料沉淀,工作液存放24小時(shí),會(huì)輕微影響定量結(jié)果。

                    3.每個(gè)樣品,吸取200uL的工作液至黑色的96孔板微孔中。為確保結(jié)果可靠,建議每個(gè)測(cè)試樣品和DNA標(biāo)樣分別做平行的3個(gè)復(fù)孔。黑色的檢測(cè)板可以減少各測(cè)試樣品間的熒光干擾。

                    4.96孔板微孔中,分別加入dsDNA標(biāo)樣或待測(cè)樣品各10 uL,并用移液器輕輕混勻。

                    5.將微孔板室溫避光孵育10分鐘,在Ex(nm):350,  Em(nm):460處用酶標(biāo)儀測(cè)量熒光值。

                    6.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算樣品濃度。

                    注意:

                    1.為了得到*結(jié)果,請(qǐng)使用校準(zhǔn)的移液器和去RNA酶的槍頭、試管以及檢測(cè)板。

                    2.建議檢測(cè)時(shí)每個(gè)DNA標(biāo)樣和未知樣品都設(shè)定3個(gè)復(fù)孔。如果檢測(cè)時(shí)不只一塊96孔板,建議每塊96孔板都設(shè)定一條標(biāo)準(zhǔn)曲線,盡量減少檢測(cè)板之間的誤差。

                    3.為得到*結(jié)果,檢測(cè)板應(yīng)在一小時(shí)內(nèi)讀取完畢。如果將反應(yīng)液重新儲(chǔ)存并在24小時(shí)內(nèi)讀取數(shù)據(jù),結(jié)果的性會(huì)有輕微損失。

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